革蘭氏染色液原理你知道嗎?
革蘭氏染色介紹：
革蘭氏染色（Gram Staining）是用于辨別細(xì)菌的種方式：這類染色法運(yùn)用細(xì)菌細(xì)胞壁上的微生物物理性質(zhì)不樣，可將細(xì)菌分為兩大類，即革蘭氏陽(yáng)性菌陽(yáng)型（Gram Positive）與革蘭氏陽(yáng)性菌呈陰性（Gram Negative）。這染色劑方式由荷蘭大夫漢斯·克里斯蒂安·革蘭于1884年所創(chuàng)造發(fā)明，開(kāi)始是用于辨別肺炎球菌與克雷白氏肺部感染菌相互關(guān)系，后營(yíng)銷推廣為辨別細(xì)菌類型的關(guān)鍵特點(diǎn)之，對(duì)由細(xì)菌感柒造成的病癥的疾病診斷及醫(yī)治擁有普遍主要用途。
革蘭氏染色基本原理
根據(jù)結(jié)晶紫初染和碘液媒染后，在細(xì)胞壁內(nèi)產(chǎn)生了不溶解水的結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物，革蘭氏陽(yáng)性菌因?yàn)槠浼?xì)胞壁偏厚、肽聚糖網(wǎng)層級(jí)較多且化學(xué)交聯(lián)高密度，故遇酒精或甲苯褪色解決時(shí)，因缺水反倒使網(wǎng)眼變小，加上它沒(méi)有類脂，故酒精解決不容易出現(xiàn)間隙，因而可以結(jié)晶紫與碘復(fù)合物緊緊留到壁內(nèi)，使其仍呈藍(lán)紫色；而革蘭陰性桿菌以其細(xì)胞壁薄、外膜層類脂含水量高、肽聚糖層薄且化學(xué)交聯(lián)度差，在遇脫色劑后，以類脂主導(dǎo)的外膜快速融解，薄而疏松的肽聚糖網(wǎng)不可以阻攔結(jié)晶紫與碘復(fù)合物的總混，因而根據(jù)酒精褪色后仍呈沒(méi)有顏色，寄內(nèi)沙黃等鮮紅色染劑復(fù)染，就使革蘭陰性桿菌呈鮮紅色 [1] 。
染色劑的差別關(guān)鍵是呈陰性與陽(yáng)型細(xì)菌細(xì)胞壁的差別所造成的。
①革蘭氏陽(yáng)性菌陽(yáng)型細(xì)菌的細(xì)胞壁
G+細(xì)菌細(xì)胞壁具備偏厚（20-80nm）而高密度的肽聚糖層，高達(dá)50層，占細(xì)胞壁成份的40%～95%，它同細(xì)胞質(zhì)的表層密不可分相接（圖2-9）。有的G+細(xì)菌細(xì)胞壁中帶有磷壁酸（teichoic-acid），也稱胞壁質(zhì)（murein），這是凡士林和核糖醇的高聚物，磷壁酸般 以糖或碳水化合物的酯而存有。因?yàn)榱妆谒釒ж?fù)電，它在體細(xì)胞表面調(diào)整正離子濃度值。磷壁酸與體細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育相關(guān)，體細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育中有自溶素（autolysins）酶類起功效，磷壁酸對(duì)自溶有著調(diào)整作用，阻攔胞壁過(guò)多溶解和壁溶。
假如細(xì)胞壁的肽聚糖層被消溶，G+體細(xì)胞變成原生質(zhì)體（protoplasts），細(xì)胞壁蕩然無(wú)存，而只留存細(xì)胞質(zhì)。除鏈球菌感染外，大部分G+細(xì)菌細(xì)胞壁中含非常少蛋白。
②革蘭氏陽(yáng)性菌呈陰性細(xì)菌的細(xì)胞壁 G—細(xì)菌細(xì)胞壁比G+細(xì)菌細(xì)胞壁薄（15～20nm）而構(gòu)造較繁雜，分外膜（outer membrane）和肽聚糖層（2～3nm）（圖2-10）。在細(xì)胞壁和細(xì)胞質(zhì)膜中間有個(gè)顯著的室內(nèi)空間，稱之為壁膜空隙（periplasmic space）。
外膜 G—細(xì)菌細(xì)胞壁外膜的基本成分是脂多糖（lipopolysaccharide,LPS），它同細(xì)胞質(zhì)膜相似之處都是兩層類脂，但除不飽和脂肪酸外還帶有多糖和蛋白。
LPS的多糖部分包含關(guān)鍵多糖和O-特異性多糖。O-特異性多糖由反復(fù)支系的糖分分子結(jié)構(gòu)構(gòu)成，帶有已糖（果糖、半乳糖和鼠李糖）和二脫氨已糖。因?yàn)樘堑姆N類不樣，使各種各樣G—體細(xì)胞具備不樣特點(diǎn)的LPS。關(guān)鍵多糖（core polysaccharide）的關(guān)鍵多組分是酮脫氨心酸（ketodeoxyoctonate, KDO）。
外膜中還帶有幾類蛋白質(zhì)，如蛋白、透亮蛋白質(zhì)。些蛋白質(zhì)具備埋孔功效（porin），管控外部分子結(jié)構(gòu)進(jìn)到體細(xì)胞；有的蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)能夠做為噬菌體的蛋白激酶；很多G—細(xì)菌對(duì)高等學(xué)校微生物有高致病是由LPS的成份決策的，它的毒副作用多組分常稱之為毒素累積（endotoxins）。
肽聚糖層 G—細(xì)菌細(xì)胞壁的肽聚糖層太薄，在大腸埃希菌和其他細(xì)菌中僅有單面。肽聚糖層和外膜的里層中間根據(jù)蛋白相互連接。
壁膜空隙 G—細(xì)菌細(xì)胞壁的外膜與細(xì)胞質(zhì)膜中間存有顯著的壁膜空隙，層薄的肽聚糖處在期間，肽聚糖層和細(xì)胞質(zhì)膜中間的空隙較寬，肽聚糖層至外膜中間的空隙窄小。大腸埃希菌的壁膜空隙總寬為12～15nm，呈膠胨態(tài)。期間帶有三類蛋白：水解酶，催化反應(yīng)食材的基本溶解；融合蛋白質(zhì)，起動(dòng)化學(xué)物質(zhì)裝運(yùn)全過(guò)程；有機(jī)化學(xué)蛋白激酶（chemoreceptors），在趨化性中起功效的蛋白質(zhì)。
染色劑結(jié)果
革蘭氏陽(yáng)性菌呈紫藍(lán)色，革蘭陰性桿菌呈鮮紅色。
