瑞氏染色液介紹
瑞氏染色液是最常用、最簡單的染色方法。在化學(xué)作用下，瑞氏試劑中的酸性伊紅與堿性美藍混合，變成中性伊紅美藍，久置后，經(jīng)氧化，含有天青。這三種染料分別與細胞核和漿液中的NH3+和COO-結(jié)合，使細胞核和漿液著色。由于是中性染料，緩沖液調(diào)節(jié)酸堿度，細胞感染后藍紅等顏色適中，核染質(zhì)、胞漿及其顆粒顏色清晰。
瑞氏染料是由堿性染料美藍(Methvlemblue)和酸性染料黃色伊紅(EostmY)合稱為瑞氏(美藍-伊紅Y)染料。伊紅鈉鹽的有色部分為陰離子，無色部分為陽離子，其有色部分為酸性，因此被稱為酸性染料。美藍通常是堿性氯鹽，其中間產(chǎn)物結(jié)晶為三氯化鎂復(fù)鹽，其有色部分為陽離子，無色部分為陰離子，與伊紅鈉鹽相反。
瑞氏染色液染液配制
溶劑
以甲醇為瑞氏染料溶劑，即瑞氏染液。作為瑞氏染料的良好溶劑，甲醇有兩種作用：
甲醇使瑞氏染料中的美藍(M)和伊紅(E)在溶液中分解，使細胞成分有選擇地吸附其中的有色物質(zhì)進行著色。在準備好的瑞氏染液中，如果放置時間過長，美藍可以氧化并含有天青。美藍天青和伊紅化合物可以將核染成紫紅色，但不能將胞漿染成藍色。多余的美藍可以將胞漿染成藍色。染色主要是化學(xué)作用，是離子結(jié)合的反應(yīng)。
(2)甲醇脫水能力強，能將細胞固定在一定形態(tài)，增加細胞結(jié)構(gòu)表面積，提高細胞對染料的吸收。同時，由于甲醇吸附染色液中的水，染色液會升溫，加速染色反應(yīng)。
瑞氏染液配制：
瑞氏染料830mg或1g。
500ml或600ml甲醇(AR)。
首先，將瑞氏染料干燥(提前放入溫箱干燥過夜)放入乳缽中，用乳棒輕輕敲擊成粉末狀，然后研磨成細粉狀(聽不到研芝麻聲)。加入少許甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸內(nèi)顯得一面鏡光澤而無染料粉粒沉著后，再加入大量甲醇研磨，使其一面鏡光亮。靜置一會兒，將上層液體倒入清潔儲存瓶中(用甲醇空瓶)，然后用甲醇研磨，重復(fù)幾次，直到乳缽中的染料和甲醇用完。染料完全轉(zhuǎn)移到儲存瓶后，搖勻，密封瓶口，室溫避光，儲存時間越長，染料溶解，分解越好，一般儲存3個月以上為好。
緩沖液
1)緩沖液的作用:染色對氫離子濃度非常敏感。根據(jù)觀察pH值的變化，蛋白質(zhì)和染料形成的化合物可以再次離解。緩沖液必須保持一定的pH以穩(wěn)定染色。PBS的pH一般為6.4~6.8。偏堿性染料可以中和緩沖液中的酸基，而偏酸性染料中和緩沖液中的堿基可以穩(wěn)定pH。
二、緩沖液配制(pH6.4~6.8，弱酸性)：
配方1:配方2:
1%KH2PO430mlM/15KH2PO473.5ml
1%Na2HPO420mlM/15Na2HPO426.5ml。
H2O(新鮮)加到1000ml。
在室溫黑暗的地方，密封瓶口，防止霉菌污染，如有污染應(yīng)報廢。
