瑞氏染色液的配制
瑞氏染色液的染液配制
溶劑
用甲醇作瑞氏染料溶劑，即成瑞氏染液。甲醇是瑞氏染料良好溶劑，有兩種作用：
（ 1 ）甲醇使瑞氏染料中美藍（ M ）與伊紅（ E ）在溶液中離解，可使細胞成分選擇性吸附其中的有色物質(zhì)而著色。 在配制的瑞氏染液中美藍如放置過久即可氧化而含有天青，美藍天青與伊紅化合物能使核染成紫紅色，但不能使胞漿染為藍色，多余 美藍就可以 使胞漿染成藍色，染色主要是化學(xué)作用，是離子彼此結(jié)合的反應(yīng)。
（ 2 ）甲醇具有強大的脫水力，可將細胞固定在一定形態(tài)及增加細胞結(jié)構(gòu)的表面積，提高細胞對染料吸收作用，同時由于甲醇吸附染色液中的水，使染色液升溫，加速染色反應(yīng)。
瑞氏染液配制：
瑞氏染料 830mg 或 1g
甲醇（ AR ） 500ml 或 600ml
先稱干燥瑞氏染料（事先放入溫箱干燥過夜）放置乳缽內(nèi)， 用乳棒輕輕敲染料成粉末狀，再研磨至細粉末狀（聽不到研芝麻聲）。加少許甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸內(nèi)顯“一面鏡”光澤而無染料粉粒沉著后，再加較多量甲醇研磨呈一面鏡光亮。靜置片刻，將上層液體倒入一清潔儲存瓶內(nèi)（用甲醇空瓶），再加甲醇研磨，重復(fù)數(shù)次，直至乳缽內(nèi)染料及甲醇用完為止。染料完全轉(zhuǎn)移至儲存瓶后，搖勻，密封瓶口，室溫下避光保存，儲存愈久，則染料溶解、分解就越好，一般儲存 3 個月以上為佳。
緩沖液
1) 緩沖液作用：染色對氫離子濃度是十分敏感的，據(jù)觀察 pH 值的改變，可使蛋白質(zhì)與染料形成的化合物重新離解。 緩沖液須保持 一定的 pH 使染色穩(wěn)定， PBS 的 pH 一般在 6.4~6.8 ，偏堿性染料可與緩沖液中酸基中和，偏酸性染料則與緩沖液中的堿基中和，使 pH 穩(wěn)定。
2) 緩沖液配制（ pH6.4~6.8 ，弱酸性）：
配方 1 ： 配方 2 ：
1% KH 2 PO 4 30ml M/15 KH 2 PO 4 73.5 ml
1% Na 2 HPO 4 20ml M/15 Na 2 HPO 4 26.5ml
H 2 O( 新鮮 ) 加至 1000ml
置室溫黑暗處，瓶口密封，防止霉菌污染，如有污染則應(yīng)報廢。
